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　　乳中抗生素的來(lái)源主要有兩種途徑,一是采用β-內酰胺類(lèi)抗生素治療牛乳腺炎造成牛乳中抗生素殘留，二是奶牛長(cháng)期喂飼含抗生素的飼料,很容易造成乳中抗生素殘留川。飲用含有抗生素的牛奶可能導致飲用者對抗生素的過(guò)敏反應,或因長(cháng)期接觸抗生素而導致耐藥。泌乳奶牛經(jīng)過(guò)藥品合理間隔期后擠奶，可以減少抗生素在奶中殘留,實(shí)現無(wú)抗奶。因此,世界各國都嚴格限定原料乳抗生素最大殘留*'2。β-內酰胺酶是由對β-內酰胺類(lèi)抗生素耐藥菌株分泌的一種胞外酶。該酶可選擇性分解β-內酰胺類(lèi)抗生素，能夠使青霉素內酰胺結構破壞而失去活性。由于利益驅動(dòng)使得不法分子利用β-內酰胺酶降解乳中所含抗生素。該酶的使用掩蓋了牛奶中實(shí)際含有的抗生素，導致青霉素、頭孢菌素等抗生素類(lèi)藥物耐藥性增高，從而大大降低了人們抵抗傳染病的能力。
 

　　對乳制品中進(jìn)行內酰胺酶檢測的方法：
 

　　1.范圍
 

　　本標準規定了乳及乳制品中舒巴坦敏感β-內酰胺酶類(lèi)藥物的檢驗方法。
 

　　本標準適用于乳及乳制品中舒巴坦敏感β-內酰胺酶類(lèi)物質(zhì)的檢驗。
 

　　本方法的檢出限為4U/mL。
 

　　2.原理
 

　　該方法采用對青霉素類(lèi)藥物絕對敏感的標準菌株，利用舒巴坦特異性抑制β-內酰胺酶的活性，并加入青霉素作為對照，通過(guò)比對加入β-內酰胺酶抑制劑與未加入抑制劑的樣品所產(chǎn)生的抑制圈的大小來(lái)間接測定樣品是否含有β-內酰胺酶類(lèi)藥物。
 

　　3.操作步驟
 

　　3.1 菌懸液的制備
 

　　將藤黃微球菌接種于營(yíng)養瓊脂斜面上，經(jīng)36士1℃培養18h-24 h，用生理鹽水洗下菌苔即為菌懸液，測定菌懸液濃度，終濃度應大于1×1010 CFU/mL，4 ℃保存，貯存期限2周。
 

　　3.2 樣品的制備
 

　　將待檢樣品充分混勻，取1 mL待檢樣品于1.5 mL離心管中共4管，分別標為：A、B、C、D，每個(gè)樣品做三個(gè)平行，共12 管，同時(shí)每次檢驗應取純水1 mL加入到1.5 mL離心管中作為對照。如樣品為乳粉，則將乳粉按1:10的比例稀釋。如樣品為酸性乳制品，應調節pH值至6-7。
 

　　3.3 檢驗用平板的制備
 

　　取90mm滅菌玻璃培養皿，底層加10 mL滅菌的抗生素檢測用培養基Ⅱ,凝固后上層加入5 mL含有濃度為1×108 CFU/mL藤黃微球菌的抗生素檢測用培養基Ⅱ,凝固后備用。
 

　　3.4 樣品的測定
 

　　按照下列順序分別將青霉素標準溶液、β-內酰胺酶標準溶液、舒巴坦標準溶液加入到樣品及純水中：
 

　　A 青霉素5 μL。
 

　　B 舒巴坦25 μL、青霉素5 μL。
 

　　C β-內酰胺酶25 μL、青霉素G5 μL。
 

　　D β-內酰胺酶25 μL、舒巴坦25 μL、青霉素5 μL。
 

　　混勻后，將上述A～D 試樣各200 μL 加入放置于檢驗用平板上的4個(gè)無(wú)菌牛津杯中，36士1℃培養培養18～22 h ，測量抑菌圈直徑。每個(gè)樣品，取三次平行試驗平均值。
 

　　3.5 結果報告
 

　　純水樣品結果應為：(A)、(B)、(D)均應產(chǎn)生抑菌圈；(A)的抑菌圈與(B)的抑菌圈相比，差異在3 mm以?xún)?含3 mm)，且重復性良好；(C)的抑菌圈小于(D)的抑菌圈，差異在3 mm以上(含3 mm)，且重復性良好。如為此結果，則系統成立，可對樣品結果進(jìn)行如下判定：
 

　　6.1 如果樣品結果中(B)和、(D)均產(chǎn)生抑菌圈，且(C)與(D)抑菌圈差異在3 mm以上(含3 mm)時(shí)，可按7.1.1、7.1.2 判定結果。
 

　　6.1.1(A)的抑菌圈小于(B)的抑菌圈差異在3 mm以上(含3 mm),且重復性良好，應判定該試樣添加有β- 內酰胺酶，報告β- 內酰胺酶類(lèi)藥物檢驗結果陽(yáng)性。
 

　　6.1.2(A)的抑菌圈同(B)的抑菌圈差異小于3 mm，且重復性良好，應判定該試樣未添加有β- 內酰胺酶，報告β- 內酰胺酶類(lèi)藥物檢驗結果陰性。
 

　　6.2 如果(A)和(B)均不產(chǎn)生抑菌圈，應將樣品稀釋后再進(jìn)行檢測。